نحوه انجام آزمایش:
معمولاً به دو دلیل از مریستم نوک ریشه برای مطالعه کاریوتایپ استفاده میگردد:
1) در این مناطق تقسیم شدید است.
2) در بذری که در حال جوانه زدن است ابتدا ریشه جوانه میزند و جداسازی آن راحتتر از مریستم ساقه است. برای انجام این آزمایش میتوان از بذور کاملاً رسیده گندم، جو، غلات، کتان و... استفاده کرد.
ابتدا بذور کاملاً رسیده گندم و شاهدانه را جمع آوری کرده و آنها را به مدت 20َ -15َ جهت ضدعفونی در درون محلول آب ژاول 10% قرار میدهیم.
نحوه ریشه دار کردن بذر:
پتری دیشهای اتو کلاو شده را برداشته، کاغذ صافی مرطوبی را کف آن قرار داده و بذور را با فاصله روی آن قرار میدهیم.
نکته) در خانواده غلات، بعضی بذور نیازمند یک پیش تیمار سرماییاند، پس بعد از مرحله بالا باید 24 ساعت درون یخچال (4-0) نگهداری کنیم تا خواب بذر شکسته شده و آماده جوانه زنی شود.
بعد از 24 ساعت، پتری را بیرون آورده و در دمای اتاق یا انکوباتور در دمای 22- 20 درجه گذاشته تا شروع به جوانه زنی کند.
معمولاً بین 5- 3 روز رشد ریشهها تحریک شده و شروع به جوانه زنی میکنند.
سپس یک مرحله پیش تیمار داریم که با چند روش انجام میگیرد. این مرحله برای مطالعه کروموزوهای مرحله میتوزی ضروری است.
این پیش تیمار 2 هدف اصلی دارد:
1) جلوگیری از تشکیل میکروتوبولها و رشتههای دوک در میتوز، پس کروموزومها در متافاز بهدام افتاده، باقی میمانند و شاخص میتوزی افزایش مییابد.
2) ایجاد کروموزومهای متراکم و فشرده پس شمارش کروموزومی آسانتر میشود.
در غلات وقتی ریشهها به اندازه مناسب رسیدند برداشته و در زمان مشخص داخللوله آزمایشی که حاوی آب سرد است قرار داده، آن را درون ظرف حاوی آب یخ قرار میدهیم. سپس تا 24 ساعت آن را درون یخچال میگذاریم.
محلول هیدروکسی لیزین دو هزارم مولار باعث مختل کردن رشتههای دوک شده،پس کروموزومها در مرحله متافازی قرار گرفته و مانع انجام ادامه تقسیم میشود. زمان استفاده از این محلول 5-3 ساعت است. سپس در دمای محیط قرار میدهیم.
نکته) شیشه این محلول بهعلت حساسیت به نور باید در درون فویل قرار گیرد.
(نسبت 3:1 الکل 96 درجه و استیک اسید گلایسیال)
نکته) شاید از بین 10 ریشه، تنها در 2 ریشه سلول خوب مشاهده شود.
برچسبها: روش تهیه کاریوتایپ گیاهان, سیتوژنتیک
.: Weblog Themes By Pichak :.

